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研究背景：
研究内容：
第一步：PFKFB3在HSC激活、纤维发生的过程中发挥重要作用
为了研究PFKFB3在HSC肝纤维化过程中的作用，作者首先使用小鼠原代HSC细胞进行了研究，作者发现，HSC激活之后，PFKFB3表达升高，且与纤维发生标志物αSMA在细胞中共定位（F1A和B）。接着，作者研究了人HSC细胞系在激活之后PFKFB3以及纤维化相关标志物的变化，发现，与小鼠HSC细胞的变化一致（F1C）。
之后，作者使用PFKFB3小分子抑制剂3PO处理细胞，抑制PFKFB3活性，从而抑制了2,6-二磷酸果糖的生成（F1D）。接着，作者使用3PO处理细胞，并观察HSC细胞形态的变化，作者发现，处理之后，细胞形态变化受到抑制，且细胞中脂滴外排过程也受到抑制（F1E和F）。接着，作者有检测了纤维化标志物，发现，标志物的生成受到抑制（F1H和G，F2A和B）。之后，作者对3PO处理之后，细胞的活性进行了检测，结果表明，处理之后，细胞的增殖能力受到抑制（F2C-F）。作者还是使用了PFKFB3的siRNA进行抑制，并检测了纤维化标志物，结果与3PO处理之后结果一致。
以上结果表明，PFKFB3在HSC激活、纤维发生的过程中发挥重要作用。
第二步：PFKFB3可抑制肝纤维化的发生。
为了进一步研究PFKFB3的在肝纤维化发生中的重要性，作者使用临床样本和动物模型进行了研究。作者发现，肝硬化患者肝中PFKFB3的表达水平显著高于正常水平（F3A和B）。动物模型的结果与以上结果一致，并且作者发现，PFKFB3在细胞核中的表达较多（F3C和D）。作者也验证了肝纤维化相关marker蛋白，结果与预期相符（F3E-G）。
接着，作者探究了PFKFB3在肝纤维化发生中，时空表达特征。作者发现，在肝纤维化造模之后，PFKFB3富集于portaltracts（F4A）。由于PFKFB3相关的信号通路往往与低氧相关，作者又检测了氧的情况，作者发现PFKFB3集中于富氧区或正常氧区域（F4B）。
之后，作者使用3PO处理模型老鼠（BDL模型）（F4C），发现几个生理特征未变化（F4D-F），但是抑制了HSC激活（F4G-J），但并未改变bileducts的数量（F4K）。
第三步：CPEB转录后调控PFKFB3的表达。
在本步，作者研究了PFKFB3在肝纤维化的HSC中过表达的机制。作者发现，HSC激活前后，PFKFB3的mRNA水平变化不显著（F5A-C）。这就表明，对PFKFB3的调控可能是在转录后，作者分析了PFKFB3的mRNA，发现，3’UTR区域存在一个反式激活调控元件的CPE结合位点，该位点供CPEB蛋白结合，促进多聚腺苷酸化，从促进翻译（F5D）。作者检测了激活的HSC中CPEB的表达，发现在激活之后，表达升高（F5E和F）。当使用3PO处理之后，CPEB表达降低（F5G和H），表达趋势与PFKFB3一致。
为了探究CPEB和PFKFB3之间联系，作者进行了RIP实验（F6A），结果表明，CPEB确实可以与PFKFB3的mRNA相结合（F6B）。接着，作者使用CPEB的抑制剂处理细胞，结果表明，处理之后PFKFB3表达下降（F6C和D），CPEBshRNA的效果与此一致（F6E-G）。作者接着又使用HSC体外造模，即TGF-β处理细胞，然后检测了PFKFB3的表达情况（F6H）（这个有点像是后期补的实验）。
第四步：转基因动物模型验证。
研究结论：
“文献伴读”
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