今天解读的大文献题目是：“Exosome-MediatedActivationofToll-LikeReceptor3inStellateCellsStimulatesInterleukin-17ProductionbyγδTcellsinLiverFibrosis.”
在肝损伤过程中，肝细胞能分泌包含各种类型的自身RNAs的外泌体。最近，自身非编码RNA（self-noncodingRNA）被认为是Toll样受体3（TLR3）的激活剂。然而，肝脏外泌体和TLR3在肝纤维化中的作用还未完全阐明。在四氯化碳（CCl4）注射1-2周引起的急性肝损伤和肝脏纤维化早期阶段中，白介素-17A（IL-17A）主要在野生型（WT）小鼠肝脏γδT细胞中产生增加。然而，相比于野生型小鼠，在TLR3敲除的小鼠中，肝脏纤维化和γδT细胞IL-17A产生均明显弱化。更有趣的是，产生IL-17A的γδT细胞与活化的肝形状细胞(HSCs)联系紧密，表明HSCs在γδT细胞IL-17A产生中发挥作用。用CCl4处理的肝细胞来源的外泌体进行体外治疗可以明显增加野生型而非TLR3敲除的HSCs细胞IL-17A、IL-1β和IL-23的产生。而且，γδT细胞通过与外泌体处理的野生型HScs或TLR3活化的野生型HSCs细胞培养上清共培养，IL-17A的产生明显增加。然而，当γδT细胞与外泌体处理的IL-17A敲除或TLR3敲除的小鼠来源的HSCs细胞共培养时，无法产生相似的结果。在野生型和TLR3敲除的小鼠彼此进行骨髓移植，我们证明了TLR3在HScs的缺陷有助于通过降低γδT细胞IL-17A的产生以及肝纤维化。
Fig.1.TLR3deficiencyattenuatesCCl4-inducedliverfibrosisofmice.TLR3缺陷可削弱四氯化碳诱导的肝纤维化。肝纤维化是由4周四氯化碳注射诱导或胆管结扎3周诱发的。A图：对血清的ALT，AST，TGF-β1和IL-17A进行了测量。（B）肝切片用天狼星红溶液和α-SMA抗体染色。（C）所有肝组织和孤立的造血干细胞被用于定量定量RT-PCR分析。（D）WesternBlot检测蛋白表达。（E）ALT，AST，总胆红素和IL-17A的血清水平在BDL处理的小鼠进行了测量。（F）肝切片用天狼星红溶液和α-SMA抗体染色。
Fig.2.AblationofTLR3genedecreasesIL-17AproductionofγδTcellsinfibroticliverofmice.野生型和TLR3KO小鼠都由4周四氯化碳注射诱导形成肝纤维化。(A、B)分离的肝单核细胞（MNCs）通过FACS分析和PCR分析。（C）:肝组织切片用IL-17A抗体和随机选择的5个区域进行了下?倍率计数阳性细胞（褐色）染色。(D):分离的肝脏MNCs用PMA（50毫微克/毫升）和离子霉素（毫微克/毫升）5小时进行再刺激，用IL-17A抗体染色。染色的细胞再进行FACS分析。
Fig.3.HepaticγδTcellsproduceinitialIL-17Ainresponsetoacuteliverinjury,leadingtostimulationofIL-17AproductioninCD4Tcells.(A):测量血清中IL-17和ALT的水平。(B,C)：将野生型和TLR3KO小鼠肝单核细胞（MNCs）通过FACS分析和PCR分析。（D）：白细胞介素-17产生的细胞的将野生型和TLR3KO小鼠离体肝脏用流式细胞仪进行分析。（E）：野生型和IL-17AKOγδT细胞过继转移到TCRδKO的小鼠进行和肝脏分离和用流式细胞仪分析。（F）：离体肝脏单核细胞用PCR分析。
Fig.4.Exosome-mediatedIL-17AproductionofHSCsenhancesIL-17AproductionofγδTcellsinthepresenceofIL-1βandIL-23.外泌体介导HSCs的IL-17A产生，并增强了γδT细胞的IL-17A、IL-1β和IL-23的产生。（A)：野生型小鼠用CCL4诱导肝纤维化2周后，对eGFP表达的γδT细胞进行FACS分析和免疫染色。（B）：从纤维化肝脏分离新鲜的HSCs，进行qRT-PCR。（C）：分离和验证取得CCL4介导肝脏的exosomes，测量ALT和AST的水平，和CCL4处理后肝脏形态的变化。（D）：用DiI染色标记exosome，而后用于处理野生型HSCs24小时。（E）Exosome处理后的HSCs用qRT-PCR处理分析。（F）野生型γδT细胞用IL-1β、IL-23、IL-17A处理，处理3小时后进行qRT-PCR分析。
Fig.5.TLR3-mediatedIL-17AproductionofHSCsamplifiesIL-17AproductionofγδTcells.（A、B）：野生型或TLR3缺失型的HSCs通过肝脏exosomes处理，随后qRT-PCR分析。(C):野生型或TLR3缺失型的HSCs直接用polyI:C或conditionedmedia分别处理6小时。(D、E):野生型γδT细胞用细胞因子或conditionedmedia分别处理3小时。（F）：野生型或TLR3缺失型的HSCs与野生型γδT细胞共培养24小时。
Fig.6.TLR3inHSCsisimplicatedinIL-17AproductionofγδTcellsinliverfibrosisandinjury.(A):肝脏切片用天狼星红溶液染色，并α-SMA抗体检测胶原蛋白的积累和HSC活化。(B)：检测血清IL-17A的水平。(C):将整个肝脏组织进行qRT-PCR分析。(D)：在第8周表达GFP的野生型骨髓的移植入WT小鼠后。对肝淋巴细胞的嵌合体进行了评估。然后，所有的嵌合体小鼠用单剂量注射（0.4ml毫升/公斤）的CCl4然后在注射后12小时处死。(E):IL-17A产生γδT细胞在CCl4注射后嵌合体小鼠进行了分析。（F）:检测嵌合体小鼠肝脏单核细胞的IL-17A的水平。
Fig.7.TLR3inhumanHSCsisimplicatedinIL-17AproductionofhumanγδTcells.（A）：从四氯化碳处理的Hep3B和人胚胎干细胞衍生的肝细胞（HES-HEP）分离的外泌体与LX-2和hTERT共培养24小时。(B):Exosomes处理的LX-2和hTERT进行QRT-PCR分析。(C):LX-2与或不与TLR3的siRNA，用Hep3B细胞或polyI：C的exosome进行处理，然后分析定量RT-PCR。（D）：人类γδ（hγδ）T细胞在IL-17A治疗后进行qRT-PCR检测。（E）：人类γδ（hγδ）T细胞用几种组合处理：IL-1β（10毫微克/毫升）中，IL-23（50毫微克/毫升），和IL-17A（50毫微克/毫升），进行qRT-PCR检测。（F）：HSCs与γδT细胞之间IL-17A扩增环路的机制。
这篇paper告诉我们，在肝损伤中，外泌体介导的HSCs细胞TLR3激活通过增加γδT细胞IL-17A的产生加剧肝脏纤维化，这种机制可能与未知的损伤的干细胞来源的自身TLR3配体刺激HSC相关。因此，TLR3可能是肝脏纤维化一个新的治疗靶点，那么这篇文章就解读到这里。参考文献：
出处：Hepatology.May14.doi:10.2/hep..
作者：SeoW,EunHS,KimSY,YiHS,LeeYS,ParkSH,JangMJ,JoEJ,KimSC,HanYM,ParkKG,JeongWI.
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